1.

Úvod

2.	Enterobacteriaceae

2.1	Enterobacter sakazakii

4.	Mikroorganismy a teplota

5.	Termorezistence Enterobacter sakazakii

5.1	Výzkum firmy Nestlé

5.2	Stanovení termorezistence

5.3	Vliv detergentů a jiných vlivů na teplotní rezistenci E. sakazakii

"5.2 Stanovení termorezistence

V roce 2003 bylo studováno několik kmenů z různých zdrojů a různých zemí (Velká Británie, Kanada, Švýcarsko). K pokusu byly použity tato média: lauryl sulphate broth (LSB), briliant green bile broth (BGBB), tryptone soya broth (TSB), brain-heart infusion (BHI), Whitley impedance broth (WIB).
Horní růstová teplota byla stanovována inokulací 104 buněk E sakazakii do 10 ml TSB, LSB a BGBB. Tyto bujóny byly inkubovány při teplotě mezi 37 až 47 °C. Optická hustota byla zaznamenána po 24 a 48 hod. Specifická růstová hodnota byla měřena na selektivních médiích (BHI, TSB, WIB) a v kojenecké stravě (IFM). Použita byla metoda RABITTM (Rapid automated bacterial impedance technique).
Termotolerance byla stanovena rozpuštěním 1 ml kultury ve 20 ml vytemperovaného TSB a kojenecké stravy na teplotu 54 – 62 °C. Dále byly pomocí regresní analýzy stanovovány D-hodnoty a Z-hodnoty.
Bylo zjištěno, že při teplotě 37 a 44 °C narostly v TSB přes noc všechny kmeny až na 109 CFU/ml. Při teplotě 47 °C nebyl po 24 hodinách pozorován žádný růst ani u jednoho kmene. Po dalších 24 hodinách (tedy celkem po 48 hod) byl sledován minimální růst u 34 % kmenů. Schopnost E sakazakii růst a fermentovat laktosu v koliformním bujonu LSB a BGBB byla zjištěna po 48 hodinách při teplotě 37 a 44 °C. Tři kmeny nerostly v LSB a BGBB při žádné teplotě ačkoliv životaschopnost byla potvrzena růstem po 48 hodinách při teplotách 37 a 44 °C.
Šest klinických a potravních kmenů bylo vybráno pro další studium. Všechny rostly mezi 6 – 45 °C (optimum 37 - 43 °C) v závislosti na použitém mediu. Na obr 1 je ukázána střední hodnota růstu všech kmenů v každém mediu. Střední generační doba při 37 °C byla 22 minut a rozsah od 14 – 29 minut. V kojenecké stravě byl rozsah užší (19 – 21 minut). Regenerační doba ve stravě byla při 6 a 21 °C 13,7 a 1,7 hodin. Při 47 °C rostl pouze zapouzdřený kmen, ale jen na kojenecké stravě. Typový kmen rostl na všech médiích pomaleji než ostatní. D-hodnoty pro typové a zapouzdřené kmeny, suspendované v TSB a kojenecké stravě, byly od 54 – 62 °C. Hodnoty jsou uvedené v tabulce 2. Průměrná Z-hodnota pro oba typy byla 5.7 °C.
Z výsledků plyne, že termotolerance E sakazakii je podobná ostatním zástupcům Enterobacteriaceae jako např. Salmonella. D- hodnoty byly stejné jako ty již dříve publikované. S využitím toho, že D60 je 1,1 min a Z60 je 5,7 °C je zřejmé že D71,2 bude 0.7s Tudíž standardně vysoká teplota při krátkém pasterizačním ošetření (15s při teplotě 71,7 °C) má za následek snížení množství životaschopných buněk o 21 log. Z tohoto důvodu není pravděpodobná žádná kontaminace během výroby ale až po samotném pasterizačním procesu. Další možností jak se může k nákaze E. sakazakii dojít je vytvoření biofilmu na materiálech jako je latex, silikon nebo také v menší míře ocel. Všechno jsou to materiály používané v souvislosti s kojeneckou stravou.7"

Práce obsahuje tabulky, grafy a fotografie. Čistého textu v práci je cca 6 stran.