Soubor obsahuje výpisky z přednášek a cvičení z Reprodukčních biotechnologií na ČZU.

"Reprodukční biotechnologie
Vše živé je z vejce (omne vivum ex ovo)
- autorem výroku je W. Harvey - lékař angl.. krále, vymyslel krevní oběh, pitval zvířata a hledal vajíčko
- J. E. Purkyně (vše živé je z vejce), R. Virchow (každá b. je z b.)
- K. E. R. von Baer, E. von Huthorn - pozoroval oocyt, r. 1826
- opomíjená spermie - objevena v r. 1676 (A. van Leeuwenhoek), oplození objasněno 1876
- spermie byla považována za cizopasníka ve spermatu
- marně v ní hledali homunkula
- oplození vajíčka spermií - 1976 - O. Hertwig, H. Fol (nezávisle na sobě, experimenty na ježovkách)
- oocyt - produkt meiózy
- klasické dogma od r. 1951 - meióza - běh na dlouhou trať
- zahájena a zastavena v těle samičího plodu
- znovuzahájena v pubertě
- znovu zastavena po dozrání vajíčka, „odbržděna“ oplozením
- opakuje se v každém pohl. cyklu
- 2 bloky - 1. - myslelo se, že u dlouhověkých savců trvá až desetiletí -
člověk, velryba, slon
- 2. - trvá jen pár hodin
- pád „zlatého dogma“ - 15. 3. 2004
- J. L. Tilly - myš tvoří nové oocyty i po dosažení dospělosti (asi 70 denně - celkem
má 2000)
- na ováriu jsou „germ stem cells“
- neustále zaniká obrovské množství vajíček
- neustále jsou nahrazována novými z GSC
- u většiny savců ale platí staré dogma
- původ germ stem cells - zdroj v kostní dřeni
- vycestují do krevního oběhu a zabudují se do ovaria
- po transplantaci kostní dřeně nebo i krevní transfuzí může dojít k zabudování
buněk dárce do vaječníku příjemkyně
- pak by mohla žena počít dítě z vajíčka, které obsahuje DNA dárce a její dítě by
nebylo biologicky její
- odpůrci myší model - propojení krevních oběhů nevedlo k ovulaci vajíček s genomem druhé samice
- transplantace kostní dřeně při sterilitě vyvolané ozářením nebo cytostaticky
obnovuje plodnost
- vajíčka ale nejsou z buněk dárce kostní dřeně
- TIlly myší model - parabióza vede k výskytu cizích oocytů v ováriu (nečekal na ovulaci)
- samičí zárodečné kmenové b. - z korové části ovárií dospělých myší izolovány b. s expresí mnoha
markerů typických pro PGC a kmenové b.
- FGSC = female germinal stem cells
- mitoticky se množí
- samičí zárodečné kmenové b. - po transplantaci FGCS s expresí GFP do ovária sterilní myši - tvorba
nových GFP-pozitivních oocytů
- přežití GSC - rozhoduje funkce okolních b. (buněčná nika)
- funkčnost buněčné niky pro GSC
- jsou tam i mezibuněčné spoje, část buněk zůstává v nice, část se diferencuje do vajíčka
- u starých ovárií nika ztrácí funkci
- následně zřejmě hynou GSC => konec reprodukční funkce
- transplantace GSC ze starého ovária do ovária mladé samice vede k záchraně GSC
- lidské oogonial stem cells OSC - J. Tilly - Nature Medicine 2012
- po přenou GFP + oogonial stem cells
- vznik GFP + oocytů ve folikulech
- GFP + oocyty ovulují a po oplození se z nich vyvíjejí GFP + embrya
- transplantace female GSC - GSC z ovaria prepubertální myši
- kultivovány a transfekovány GFP
- injikovány do ovaria myši po chemoterapii, která zničila její GSC
- obnova plodnosti - potomci GFP +
- model pro léčbu rakoviny žen
- existence OSC u Ho - dřívější indicie - A. Bukovský - 1995
- význam pro léčbu neplodnosti (předčasná menopauza, kuřačky,
neplodnost po léčbě cytostatiky a ozařováním)
- význam pro studium efektu endokrinních disruptorů
- kultivace germ stem cells in vitro
- během 5 dnů kultivace s fenolovou červení se tvoří oocyty a zrají
do metafáze II
- hnutí odporu - mnoho vědců s Tillym nesouhlasí
- 2005 - otevřený dopis (Cell)
- některé experimenty svědčí ve prospěch Tillyho teorie
- jiné experimenty nahrávají odpůrcům
- Tilly cituje Schopenhauera „Všechny zásadní pravdy procházejí třemi stádii. Nejprve jsou
zesměšňovány, pak zuřivě vyvraceny, aby byly nakonec přijaty jako samozřejmost.“
- zánik apoptózou - fragmentace b. a DNA, uvolnění apoptotických váčků a jejich pohlcení okolními b. (ty
je využijí pro svou vlastní existenci)
- u vajíčka ale se na ně kumulární b. nedostanou kvůli ZP a váčky nesežerou =>
nahromadí se jako hrozen
- Kosman Khuliův - rodí se dvojčata
- jsou chimérní v mnoha tkáních včetně gonád (varle i ovárium)
- v placentě mají stejný krevní oběh, vyměňují si navzájem buňky
- samice předala synovi ve vajíčku bratrovu dědičnou informaci včetně samčího Y
chromozomu
- vzniklo vajíčko s Y chromozomem a spermie s X, i tak vznikl normální jedinec
- oddálení menopauzy - zamražení ovariálního štěpu a v pozdějším věku autotransplantace
- kůra ovaria s folikuly, izolované folikuly, folikuly v alginátu
- reverze menopauzy - injekce plasmy obohacené o destičky (PRP - platelet rich
plasm) do ovaria po menopauze
- údajná obnova cyklu, ovulace a plodnosti
- mechanismus nejasný, růstové faktory
- PRP - se nabízí pro regeneraci (?)
NEUROHUMORÁLNÍ ŘÍZENÍ REPRODUKCE
- nervová a humorální regulace
- nervová regulace - retikulární formace - tvořena rozptýlenými nervovými b. od míchy až do středního
mozku a mezimozku
- je akumulátorem vzruchů, které převádí na mozkovou kůru -
tonizace kůry
- limbický systém - zahrnuje i thalamus a jádra hypothalamu
- reguluje tělesnou teplotu, hlad, žízeň, emoce, sex. funkce
- mozková kůra - tlumí a reguluje výše uvedené
- tyto systémy jsou ovlivňovány veškerými procesy v CNS a regulují jak řídící centra
(hypothalamus, hypofýza), tak i výkonné orgány (hl. svalovina pohl. orgánů)
- pohl. činnost je reflexní, lze vytvářet podmíněné reflexy, které mohou vést ke
změnám pohl. chování
- adopce zvířat (kolouch odchovaný na flašku), učení - opice, nácvik plemenných zvířat
na odběry spermatu
- individuální rozdíly - nervové typy (sangvinik, flegmatik, cholerik, melancholik):
• slabý nevyrovnaný - melancholik
- pozitivní reflexy se vytváří složitě, když přijde negativní
stimul => reflex rychle vyhasíná
• silný nevyrovnaný - cholerik
- rychle se naučí, ale těžko se ovládá
• silný mírný vyrovnaný - flegmatik
- trvá jim dlouho, než se naučí reflex, když už se vytvoří,
tak trvá => naučí se na odběr spermatu
• silný živý vyrovnaný - sangvinik
- rychle reagují na pozitivní stimuly, když přijde negativní
stimul, reflex přetrvá
- humorální regulace:
• hypothalamus - součást mezimozku, dno III. mozkové komory, vybíhá z něj stopka neurohypofýzy
- GnRH - releasing hormony
- GnIF - inhibiční faktory
- krátké peptidy, biologický poločas aktivity - minuty => nemůžou působit na velkou
vzdálenost
- analogy tohoto hormonu mají o 1 AMK víc => delší poločas rozpadu, může se
podávat injekčně
- pulsační sekrece hormonů:

➢ v krvi je nějaké základní množství hormonu
➢ když prudce naroste, rychle se vrátí na bazální hladinu
➢ pokud je třeba, aby hormonu bylo hodně, je třeba, aby se uvolňoval
jedním pulsem za druhým, aby se nestihl odbourat a bylo ho v krvi dost
- hormon uvolňovaný v pulzech, v závislosti na poločasu aktivity vydrží vyšší konc.
hormonu, pokud má na něj těo reagovat, musí se uvolňovat v pulzech neustále
- kisspeptiny - určují pulsaci GnRH
- proteiny syntetizované podle genu KiSS-1
- sytetizuje se prekurzor prepro-kisspeptin 145 AA v hypothalamických
jádrech
- z něj se štěpí (řadí se do několika tříd podle počtu AMK)
▪ kisspeptin-54 (metastatin) - AA68-AA121
▪ kisspeptin-14 - AA10-AA121
▪ kisspeptin-13 - AA109-AA121
▪ kisspeptin-10 - AA112-AA121
- exprese jednotlivých kisspeptinů v hypot"

PRÁCE BYLA UVOLNĚNA BEZ NÁROKU NA HONORÁŘ